Příprava roztoků | KrioRus
Výpočty jsou uvedeny v souboru „Perfusate BPS-7.xls“ (https://dl-web.getdropbox.com/get/KrioRus/Organisation/Technology/Perfusion%20cryoprotector/BPS%20-%20Proposals%20and%20considerations% 20Darwin/ Perfusate%20BPS-7.xls?w=faec9e67 – je možné, že tento odkaz nebude fungovat, pokud se změní parametr za w)
12.04.2009. dubna XNUMX přijel Klinkov a roztřídil váhu činidel.
Vážení chemikálií
| Látka | hmotnost pro průmysl řešení | hmotnost pro výkon. řešení |
| KCl | 11,2 g | 67,2 g |
| NaHCO3 | 4,2 g | 25,2 g |
| KH2PO4 | 4,9 g | 29,4 g |
| MgCl2• 6H2O | 2,45 g | 14,7 g |
| Glukóza | 162,2 g | 973,2 g |
| Manitol | 45,55 g | 0 g |
Příprava chemikálií k použití
viz například způsob odstraňování krystalů z mannitolu
Návod na výrobu vymývacího roztoku a perfuzátu.
Promývací roztok:
Pro přípravu jednoho litru mycího roztoku použijte následující složení:
| Látka | hmotnost na litr |
| KCl | 2,24 g / l |
| NaHCO3 | 0,84 g / l |
| KH2PO4 | 0,98 g / l |
| MgCl2• 6H2O | 0,49 g / l |
| Glukóza | 32,44 g / l |
| Manitol | 9,11 g / l |
Tyto sloučeniny se rozpustí v jednom litru destilované vody.
Pro úpravu pH roztoku na 7,6 rozpusťte 1 g KOH ve 2 ml destilované vody a přidejte 15 kapek výsledného roztoku na každý litr promývacího roztoku.
Poznámka Vladimír: Toto doporučení předpokládá, že používáte vysoce kyselou vodu, ale voda může být i zásaditá. K uvedení do neutrálního stavu (pH = 7.6) může být kromě alkálie (KOH) zapotřebí také kyselina (HCL). Nejjednodušší způsob měření hodnoty pH není pomocí vhodných přístrojů (vyžadují kalibraci), ale pomocí kapkového testu – roztok indikátoru a tabulku kalibračních barev najdete v obchodech, které prodávají příslušenství pro akvária nebo bazény.
Promývací roztok se filtruje na 45 um (um – mikron) filtru. Používáme vakuový filtr 45 um dodávaný společností Fisher Scientific.
Poznámka Vladimir: V roce 2004 začala německá společnost FluXXion vyrábět filtry založené na poměrně starém patentu Philips, včetně těch se stejným průměrem otvoru. Filtry založené na nové technologii vyžadují znatelně nižší tlaky (asi 0.1 atmosféry), aby fungovaly a fungovaly rychleji. Všimněte si, že velikost asi 0.5 mikronu je srovnatelná s velikostí většiny bakterií, tzn. takový filtr je zdržuje.
K přípravě pacienta se používá 5 litrů oplachového roztoku.
KTR – koncentrovaný transportní roztok (250 ml každý)
»Na jeden litr glycerolperfusátu (o různých koncentracích glycerolu) se použije 250ml dávka KTP.
| Látka | hmotnost na 250 ml KTP |
| KCl | 2,24 g / l |
| NaHCO3 | 0,84 g / l |
| KH2PO4 | 0,98 g / l |
| MgCl2• 6H2O | 0,49 g / l |
| Glukóza | 32,44 g/l |
Tyto sloučeniny se rozpustí ve 250 ml destilované vody.
Pro úpravu pH roztoku na 7,6 rozpusťte 1 g KOH ve 2 ml destilované vody a přidejte 15 kapek výsledného roztoku do transportního roztoku.
Přefiltrujte transportní roztok pomocí 45um filtru.
Promývat
Na každý litr perfuzátu připravte 250 ml koncentrovaného transportního roztoku a upravte pH na 7,6, jak je popsáno výše. Poté přidejte příslušné množství glycerinu a destilované vody podle níže uvedeného postupu.
Například pro přípravu 20% (v/v) glycerolového perfusátu smíchejte 250 ml výsledného koncentrovaného transportního roztoku s 200 ml glycerolu a 550 ml destilované vody.
Chcete-li získat glycerolový perfusát různých koncentrací, použijte následující postup:
- 10% glycerol perfusát – 100 ml glycerolu + 250 ml koncentrovaného transportního roztoku + 650 ml destilované vody.
- 20% glycerol perfusát – 200 ml glycerolu + 250 ml koncentrovaného transportního roztoku + 550 ml destilované vody.
- 40% glycerol perfusát – 400 ml glycerolu + 250 ml koncentrovaného transportního roztoku + 350 ml destilované vody.
- 75% glycerol perfusát – 750 ml glycerolu + 250 ml koncentrovaného transportního roztoku.
K perfuzi jednoho pacienta použijeme celkem 5 litrů 10% glycerolperfuzátu, 5 litrů 20% glycerolperfuzátu, 8 litrů 40% glycerolperfuzátu a 12 litrů 75% glycerolperfuzátu.